實驗室層析技術操作原理、步驟及適用范圍

 

紫外檢測儀、蠕動泵、記錄儀、ATK層析系統、層析柜、樹脂、樣品等。

 

二、實驗室層析技術原理

 

由于填料的不同，各個實驗室所使用的層析技術的原理也不*相同。但不外乎以下幾種基本原理：分子篩作用、離子交換作用、親和層析作用等等。分子篩作用是由于填料上有一定規格的孔徑，分子量大小不一樣的樣品流過柱子時所受到的作用力不一樣，所走的路徑也不同，所以流出柱子的時間也就有了差異，不同組分得以分開。離子交換是由于正負電荷的吸引而使樣品掛在填料上，改變溶液環境，使樣品分子所帶的電荷產生變化，從而被洗脫下來，不同組分與柱料的吸附作用力時不同的，從而洗脫條件也是不同的。親和層析就是柱料與被分離樣品特異性的吸附結合一起，從而使被分離物質與其他成份分離開來。

 

三、實驗室層析技術適用范圍

 

1、蛋白質分子量的測定

 

2、蛋白質的分離純化

 

3、多糖的分子量測定

 

4、多糖的分離純化

 

四、實驗室層析技術操作步驟

 

1、柱料的前處理

 

2、選擇合適直徑與長度的層析柱，裝柱

 

3、裝完柱之后就連上紫外檢測器，檢驗260nm處的吸光值

 

4、用上樣緩沖液平衡柱子

 

5、將樣品液濃縮后上樣

 

6、洗脫液洗脫，部分收集器收集各個組分

 

7、分別測定各個組分的濃度和含量；合并活力峰

 

五、實驗室層析技術注意事項

 

1、柱料前處理一定要*，*，將雜質全部除去。

 

2、上樣之前柱子平衡要過夜。

 

3、分子篩層析時點樣量不能過大，柱面一定要平。

 

4、上樣、洗脫時一定要對目標產物跟蹤去向。