層析實驗冷柜廠家講解離子交換層析的操作

 

   選擇理想的交換劑是提高分辨率和有效成分獲得率的重要前提：選擇交換劑時應從如下幾方面加以考慮。首先要選擇對陽離子交換劑或陰離子交換劑，使被分離物質的電9荷與交換劑平衡離子的電荷正負性相同。對于兩性離子，應根據其在穩定的pH范圍內所帶的電荷選擇交換劑。其次要對強弱離子交換劑進行選擇。離子交換層析中一般不用中強度的交換劑。強性離子交換劑常用于無離子水的制備和分離一些在pH時較穩定的化合物。分離生物樣品習慣于弱性離子交換劑。第三要選擇平衡離子。為了提高交換容量，一般要選擇親合力較小的平衡離子。強性交換劑應分別選擇H型和OH型。弱性交換劑應分別選擇Na型或Cl型。離子交換樹脂含活性基團多、交換容量大、機械強度高、流動速度快，主要用于分離無機離子和氨基酸核苷酸等小分子物質。大分子化合物要用多糖類離子交換劑，因為這些交換劑的電荷基團分布在其表面，大分子化合物要用可很容易的和它們起交換反應。

 

2、緩沖液的選擇

 

    緩沖液的選擇原則4條：

①陰離子交換劑選用陽離子緩沖液（如氨基乙酸、銨鹽、Tris等），陽離子交換劑選用陰離子緩沖液（如乙酸鹽、磷酸鹽等），以防緩沖離子參與交換過程，降低交換劑的交換容量。

②緩沖液pH值的選擇要使被分離物質的電荷與平衡離子電荷的正負性相同。

③選用的緩沖系統對分離過程無干擾。

④要確定一定的離子強度。

 

3、離子交換劑的制備

 

   離子交換劑的制備有如下幾個步驟：

①漂洗目的是除去雜質。無論是新啟用的，還是再生的交換劑，在處理或轉型前都要經過這一步。漂洗是將交換劑在大燒杯中用低于40℃的水反復洗滌，用傾倒法除去細小顆粒（這一步一定要到做位。留下細小顆粒會堵塞層析柱下的尼龍網眼。）直至水清澈無色。

②處理用酸堿輪換浸泡，以便使交換劑帶上需要的平衡離子。處理方法為，樹脂可用2一4倍0.5mol/LNaoH或0.5momol/LHCI溶液處理。纖維素和葡聚糖只能用0.5mol/LNaoH+0.5mol/LNacl混合溶液或0．5mol/LHCl處理。處理順序決定于交換劑攜帶的平衡離子.每次用酸或堿處理后,勻應用水洗至中性.處理的目的除使交換劑帶上所需離子外,還可增加交換容量.樹脂來講，通過處理，樹脂充分吸水溶脹，使網孔開大,更有利于小分子物質進到顆粒內部進行交換反應。對于纖維素離子交換劑來講，干的交換劑由于眾多氫鍵的作用，使纖維素分子壓的非常密實，導致許多電荷基團被埋藏起來當交換劑經過酸、堿處理后，其電荷基團都轉變為帶電形式：電荷基團帶有同種電荷，則由于電荷的排斥作用使交換劑得到大程度的膨脹，電荷基團充分暴露，從而有利于離子平衡和交換反應。由于強酸強堿可能使這類交換劑分解，所以使用濃度應控制在0.5mol/L以內，處理時間不應超過1.5小時。

③平衡、經處理后，要用大量的水懸浮交換劑，后用緩沖液平衡。

④再生使用過的交換劑，可用一定的方法使其恢復到原來的狀

⑤轉型離子交換劑有時需要從一種平衡離子轉換成另一種平衡離子，這種平衡離子的轉換過程叫轉型。轉型是用含欲轉換平衡離子的溶液處理交換劑。

相關產品：層析實驗冷柜